Визначення вмісту щавлевої кислоти у фруктах та овочах за допомогою високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ)
1. Експериментальний принцип та розробка методу
Як поширена органічна кислота у фруктах та овочах, вміст щавлевої кислоти безпосередньо впливає на смак та харчову цінність їжі. У цьому експерименті використовується високоефективна рідинна хроматографія з оберненою фазою (RP-HPLC). В умовах кислої рухомої фази щавлева кислота відокремлюється по базовій лінії від речовин, що заважають, за допомогою хроматографічної колонки C18. Для кількісного аналізу використовується ультрафіолетовий детектор, встановлений на 210 нм, на основі характеристик поглинання ультрафіолету карбоксильними групами в молекулах щавлевої кислоти.
2. Стандартна крива та підготовка зразка
Для приготування стандартних розчинів використовується метод градієнтного розведення: точно зважують 25,0 мг дигідрату щавлевої кислоти та розводять до 25 мл ультрачистою водою, щоб отримати маточний розчин з концентрацією 1 мг/мл. Його послідовно розводять серією стандартних розчинів з концентрацією 50, 100, 200, 400 та 800 мкг/мл, причому кожну концентрацію вводять у трьох повторностях.
Для підготовки зразків використовується мікрохвильова екстракція: зважують 5,00 г гомогенату фруктів/овочів, додають 10 мл розчину хлоридної кислоти з концентрацією 0,1 моль/л, обробляють мікрохвильовою піччю при температурі 60°C протягом 10 хвилин, фільтрують через мембранний фільтр 0,45 мкм та збирають фільтрат для тестування.
3. Оптимізація хроматографічних умов
Рухома фаза являє собою систему буферного розчину дигідрофосфату калію (pH 2,5) – ацетонітрилу (95:5) з концентрацією 0,01 моль/л, зі швидкістю потоку 0,8 мл/хв та температурою колонки 35°C. Регулювання пропорції ацетонітрилу показує, що коли органічна фаза перевищує 10%, час утримування щавлевої кислоти скорочується до менш ніж 3 хвилин, але відбувається утворення хвостів піку. За кінцевих оптимізованих умов час утримування щавлевої кислоти становить 4,2 хвилини, що забезпечує повне відділення від сусідніх лимонної та яблучної кислот (роздільна здатність > 1,5).
4. Валідація методу
Верифікація лінійного діапазону показує хороший лінійний зв'язок між площею піку та концентрацією в діапазоні 10–1000 мкг/мл (R² = 0,9993). Межа виявлення (LOD), визначена методом відношення сигнал/шум, становить 0,5 мкг/мл. У тестах на повторюваність RSD для шести повторних визначень одного й того ж зразка шпинату становить 1,8%. Експерименти з відновленням шипу на трьох рівнях (80%, 100% та 120%) дають середнє відновлення 98,2%, 102,4% та 97,8% відповідно, що відповідає вимогам кількісного аналізу.
5. Аналіз реальних зразків
Було протестовано шість комерційно доступних фруктів та овочів: шпинат (356 ± 12 мг/100 г), селера (215 ± 9 мг/100 г), помідори (18 ± 2 мг/100 г), яблука (6 ± 1 мг/100 г), банани (не виявлено) та броколі (89 ± 5 мг/100 г). Порівняння з національним стандартним методом (GB 5009.277-2016) показує, що відносне відхилення між двома методами становить менше 5%, що підтверджує надійність цього методу. Зокрема, метод ВЕРХ демонструє вищу чутливість, ніж традиційні методи титрування, при аналізі зразків з низьким вмістом.
6. Ключові нотатки
Суворо контролюйте значення pH під час попередньої обробки зразка. Якщо pH екстракту перевищує 3, осадження оксалату кальцію призведе до низьких результатів тестування. Рухому фазу слід готувати свіжою щодня, щоб уникнути осадження солей та закупорювання колонки. Після кожних 20 ін'єкцій промивайте колонку сумішшю ацетонітрил-вода (30:70) протягом 30 хвилин, щоб запобігти зниженню ефективності колонки. Для зразків, що містять пігменти (наприклад, пурпурова капуста), рекомендується додати етап очищення твердофазною екстракцією перед ін'єкцією.
7. Інструкції із застосування та розширення
Цей метод можна розширити для виявлення щавлевої кислоти в біологічних зразках, таких як сеча та кров. Регулюючи склад рухомої фази (наприклад, додаючи гідроксид тетрабутиламонію), щавлеву кислоту та її метаболіти можна визначати одночасно. У поєднанні з мас-спектрометричним детектором можна встановити точніший метод виявлення слідів. У харчовій промисловості цей метод може забезпечити важливу підтримку даних для вибору сортів з низьким вмістом щавлевої кислоти та оптимізації процесів приготування їжі.
Хімічна компанія Zibo Anhao, Ltd. – Щавлева кислота
Компанія Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. є надійним постачальником та експортером високоякісної щавлевої кислоти (промислового класу, мінімум 99,6%) з провінції Шаньдун, Китай. Наша щавлева кислота — це біла кристалічна тверда речовина, також відома як етандіова кислота, з молекулярною формулою C₂H₂O₄. Вона характеризується високою чистотою, низьким вмістом домішок та стабільною якістю в усіх партіях, що відповідає вимогам текстильної, шкіряної, металургійної, обробної промисловості рідкоземельних елементів, хімічного очищення та будівельної промисловості.
Ми постачаємо як безводну, так і дигідрат щавлевої кислоти, доступну в мішках по 25 кг, мішках по 50 кг та мішках насипом по 1000 кг. Завдяки суворим процедурам контролю якості, повним звітам про випробування та гнучким планам поставок ми забезпечуємо стабільні поставки та стабільну якість для покупців з усього світу. Наша продукція широко експортується до Південно-Східної Азії, Європи, Африки та Америки, де вона отримала визнання за надійну якість та конкурентні ціни.
Оберіть Zibo Anhao Chemical для надійного постачання щавлевої кислоти та професійного комплексного хімічного обслуговування.
Оберіть Zibo Anhao Chemical, щоб отримати високочисту щавлеву кислоту, яка забезпечує стабільну продуктивність та цінність для вашого бізнесу. Звертайтеся до нас для оптових замовлень або технічних специфікацій: info@anhaochemical.com
